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dna的粗提取與鑒定
實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定
教學(xué)目的
1、初步掌握DNA的粗提取和鑒定的方法
2、觀察提取出來(lái)的DNA物質(zhì)
實(shí)驗(yàn)原理
1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度的變化而改變的。當(dāng)NaCl的物質(zhì)的量濃度為0.14mOl/L時(shí),DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
2、DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。
3、DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。
注意事項(xiàng)
1、步驟3析出含DNA的黏稠物中，蒸餾水要沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩加入，不能一次快速倒入。
2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，但是在不同的步驟中玻璃棒的用法不同。
實(shí)驗(yàn)用具
雞血細(xì)胞液(5～10mL);體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精，蒸餾水，質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液，物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液，二苯胺試劑;燒杯(100mL，1個(gè)， 50mL， 500mL，各2個(gè))，漏斗，試管(20mL，2個(gè))，玻璃棒，滴管，量筒(100mL，1個(gè))，紗布，鑷子，濾紙，鐵架臺(tái)，鐵環(huán)，三角架，酒精燈，石棉網(wǎng)，載玻片，試管夾。
課時(shí)安排
一課時(shí)
課前準(zhǔn)備
制備雞血細(xì)胞液，方法是：將質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液100mL，置于500mL燒懷中，注入新鮮的雞血(約180mL)，用玻璃棒攪拌，使其充分混合，以免凝血。靜置于冰箱內(nèi)一天，使血細(xì)胞自行沉淀。也可以用離心機(jī)離心2 min(轉(zhuǎn)速1000轉(zhuǎn)/分)。用吸管吸去上清液。
板書(shū)
實(shí)驗(yàn)十一 DNA的粗提取與鑒定
實(shí)驗(yàn)原理
1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2、用冷酒精提取出含雜質(zhì)較少的DNA。
3、DNA在沸水浴時(shí)被二苯胺染成藍(lán)色。
方法步驟：
1、提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)：順時(shí)針?lè)较驍嚢�，稍快，稍重�?5 min
2、溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA
3、析出含DNA的黏稠物：蒸餾水300mL，逆時(shí)針?lè)较驍嚢�，緩�?/p>
4、過(guò)濾：取黏稠物
5、再溶解：順時(shí)針?lè)较驍嚢瑁^慢。3 min
6、過(guò)濾：取濾液。
7、提取出含雜質(zhì)較少的DNA，逆時(shí)針?lè)较驍嚢�，稍慢�? min
8、DNA的鑒定：沸水浴5min((1)無(wú)變化(2)藍(lán)色)
上節(jié)課我們通過(guò)幾個(gè)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，證明了DNA是主要的遺傳物質(zhì)。那么DNA是什么樣的物質(zhì)呢?今天我們就通過(guò)實(shí)驗(yàn)將它提取出來(lái)，進(jìn)行觀察和鑒定。
通過(guò)預(yù)習(xí)，我們知道選用雞血細(xì)胞液作為實(shí)驗(yàn)材料。在制備雞血細(xì)胞液時(shí)，所用的檸檬酸鈉有防止血液凝固的作用。
制備過(guò)程中，一定要用剛宰殺的雞的新鮮血，并且要與抗凝劑充分混合，防止凝血。我們采用靜置一天的方法，獲得雞血細(xì)胞液。
大家在動(dòng)手做實(shí)驗(yàn)之前先要明確幾個(gè)需要注意的問(wèn)題。
1、要嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)的方法步驟去操作。
2、實(shí)驗(yàn)中有多個(gè)步驟都要用玻璃棒進(jìn)行攪拌，使用時(shí)玻璃棒不要碰到燒杯底，在不同的步驟中玻璃棒的用法不同，每一步的用法參照黑板上的指導(dǎo)去操作。
3、在DNA的鑒定中，所用的二苯胺是一種有毒性的試劑，大家在使用時(shí)注意不要讓藥液接觸到皮膚或身體的其他部位，也不要近距離觀察。
下面在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過(guò)程中，要思考每一操作步驟要達(dá)到什么目的。
在進(jìn)行步驟1時(shí)，利用攪拌的5分鐘，做如下提問(wèn)：
為什么要加蒸餾水?加入蒸餾水后細(xì)胞將會(huì)怎樣?
(讓細(xì)胞內(nèi)溶液的濃度大于周?chē)芤旱臐舛�，�?xì)胞會(huì)吸水以至脹破)
為什么要用力攪拌?
(可以加速血細(xì)胞和細(xì)胞核的破裂)
所以下一步驟過(guò)濾將濾去的是細(xì)胞膜和核膜等物質(zhì)。
在進(jìn)行步驟3時(shí)，要向全班明確：這一步驟是這個(gè)實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，注意加蒸餾水的方法和使用玻璃棒的方法，千萬(wàn)不能太快太猛，防止打碎DNA。
觀察濾取出來(lái)的黏稠物的顏色。
有的同學(xué)提取的黏稠物較少，原因可能是在溶解DNA時(shí)不充分，也可能是析出黏稠物時(shí)攪拌的快了。
將黏稠物再溶解時(shí)一定要充分，多攪拌。以免有DNA損失。
加入冷酒精時(shí)動(dòng)作要慢。
當(dāng)玻璃棒上出現(xiàn)絲狀物纏繞時(shí)，繼續(xù)慢慢攪拌。至不再增加時(shí)，取出吸干上面的水分。仔細(xì)觀察絲狀物呈什么顏色?(黃色)
這些絲狀物要用二苯胺鑒定。使用二苯胺時(shí)要注意不要接觸到藥液。進(jìn)行沸水浴時(shí)，在實(shí)驗(yàn)室較為通風(fēng)的地方集體進(jìn)行。
利用沸水浴的5 min。
步驟3中加入蒸餾水的目的?與步驟1有什么區(qū)別?
(步驟3中加蒸餾水是使NaCl溶液的濃度逐漸降至0.14mol/L，使DNA的黏稠物析出。而步驟1加蒸餾水是為了讓細(xì)胞吸水脹破)
步驟7為什么要加50mL的冷酒精?
(因?yàn)镈NA不溶于冷酒精，而其他物質(zhì)可以溶解在酒精中，使含雜質(zhì)較少的DNA絲狀物可以析出。懸浮于溶液中)
現(xiàn)在大家從水浴鍋中拿出試管，比較兩個(gè)試管中溶液的顏色有什么不同?
(有絲狀物的試管變成藍(lán)色，另一試管還是原來(lái)顏色)
這一鑒定結(jié)果說(shuō)明什么問(wèn)題?
(提取出的絲狀物是DNA)
那么你看到的絲狀物的粗細(xì)是不是DNA分子的直徑呢?
(不是。DNA分子直徑只有2nm。絲狀物是多個(gè)DNA分子聚在一起形成的)
下面請(qǐng)同學(xué)們將實(shí)驗(yàn)用具，按原樣擺放整齊，實(shí)驗(yàn)桌要保持清潔。
今天我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)將DNA提取出來(lái)進(jìn)行了觀察和鑒定，那么DNA的化學(xué)組成，分子結(jié)構(gòu)和復(fù)制是怎樣的?我們下節(jié)課再繼續(xù)研究。
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