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臨床檢驗(yàn)師考點(diǎn)：酶免疫技術(shù)
酶免疫技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶高效催化反應(yīng)的專一性相結(jié)合的一種免疫檢測技術(shù)。它是將酶與抗體或抗原結(jié)合成酶標(biāo)記抗體或抗原，此結(jié)合物既保留了抗體或抗原的免疫學(xué)活性，同時(shí)又保留了酶對底物的催化活性。
技術(shù)原理：
免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合的一種方法。它以酶作為標(biāo)記物，與抗體或抗原聯(lián)結(jié)，與相應(yīng)的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應(yīng)作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學(xué)技術(shù)。
目前應(yīng)用最多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)，它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)均在載體表面進(jìn)行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實(shí)驗(yàn)方法包括間接法、夾心法及競爭法。
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔)上，然后加被測溶液，倘樣品中有相應(yīng)抗原，則與抗體在載體表面形成復(fù)合物。洗滌后加入酶標(biāo)記的特異性抗體，后者通過抗原也結(jié)合到載體的表面。洗去過剩的標(biāo)記抗體，加入酶的底物，在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)酶催化產(chǎn)生的有色產(chǎn)物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀察或分光光度計(jì)測定。
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附于載體上，然后加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成復(fù)合物。洗滌后加酶標(biāo)記的抗球蛋白(抗抗體)與之反應(yīng)。洗滌后加底物顯色，有色產(chǎn)物的量與抗體的量成正比。
常用的酶有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)，相應(yīng)的底物分別是鄰苯二胺(OPD)和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應(yīng)為棕黃色，后者為藍(lán)色�？捎媚繙y定性，也可用酶標(biāo)儀測定光密度(OD)值以反映抗原含量。
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